Buněčné kultivační médium musí obsahovat dostatek živin, aby pokrylo látky a energii potřebné pro biochemické reakce, jako je syntéza nových buněk a buněčný metabolismus. Hlavními složkami buněčného kultivačního média jsou voda, aminokyseliny, vitamíny, sacharidy, anorganické soli a další pomocné živiny. Proto musíme při každodenních experimentech věnovat pozornost metodě sterilizace buněčného kultivačního média a souvisejícím opatřením.
buněčná kultura
1. Metody sterilizace a preventivní opatření pro různá buněčná kultivační média
Metody sterilizace buněčného kultivačního média se dělí na sterilizaci v autoklávu a sterilizaci membránovou filtrací. Různá kultivační média mohou mít různé metody sterilizace kvůli jejich různým živinám.
Autokláv
Některá média, jako je MEM, lze autoklávovat, tato média obecně neobsahují L-glutamin a hydrogenuhličitan sodný a obvykle se přidávají po autoklávování média. Kromě toho lze místo L-glutaminu použít vysokotlaký glutamát (jako je L-alanyl-L-glutamin). Autoklávovatelné médium je plně sterilizováno s minimální ztrátou živin při 121 stupních, 15 psi a 15 minutách, bez prodloužení doby sterilizace.
Většina médií pro buněčné kultury není vhodná pro autoklávování. Protože kultivační médium často obsahuje vitaminy, proteiny, polypeptidy, růstové faktory a další látky, jsou tyto látky náchylné k denaturaci nebo ztrátě funkce při vysoké teplotě nebo radiaci, proto jsou výše uvedené tekutiny většinou filtrovány a sterilizovány, aby se odstranily bakterie. Pro filtraci a sterilizaci je k dispozici mnoho filtračních membrán a jejich materiály jsou většinou PES, nylon, polykarbonát, acetát celulózy, nitrocelulóza, PTFE, keramika atd. Membránová filtrační sterilizace je v současnosti běžně používanou a pohodlnou metodou. Často se používají filtrační membrány s velikostí pórů 0,2 μm a některé používají velikost pórů 0,1 μm. Ve srovnání s vysokotlakou filtrací mají membrány životnost a jsou dražší, ale jsou méně destruktivní pro živiny v buněčném kultivačním médiu.
2. Bezpečnostní opatření během skladování různých médií pro kultivaci buněk
Tekuté kultivační médium by obecně nemělo být zmrazováno na -20 stupeň, protože během rozmrazování se mohou vysrážet živiny, což ovlivní účinek kultivace. Za normálních okolností by měl být skladován při teplotě 2 ~ 8 stupňů od světla. Před použitím jej vyjměte z lednice a dejte při pokojové teplotě, aby došlo k vyrovnání. Obvyklé tekuté médium má platnost 6 až 12 měsíců. Snažte se vyhnout dlouhodobému skladování tekutého buněčného kultivačního média. Glutamin v něm se bude s prodloužením doby skladování pomalu rozkládat. Pokud růst buněk není dobrý, můžete zvážit testování obsahu glutaminu v médiu, abyste zjistili, zda přidat glutamin. . Komerčně dostupné tekuté buněčné kultivační médium má specifické datum expirace. Po použití suchého práškového buněčného kultivačního média k přípravě kapaliny by mělo být také skladováno při nízké teplotě (2 ~ 8 stupňů). Kromě snadné degradace glutaminu v médiu mohou být se zvyšující se teplotou degradovány nebo vysráženy i další složky v médiu.
