Naše provozní metody, podrobnosti a teoretická vysvětlení se stanou pokyny pro vaši operaci, jako je umístění živných roztoků a buněčných baněk; sterilizační postupy; Abychom se naučili jejich správnou obsluhu, je nutné se jim hned napoprvé věnovat.
Péče o buňky jako výchova dětí
Buňky jsou opravdu křehké. Nejlepší je kontrolovat ho každý den, abyste předešli abnormálním jevům, jako je nedostatek vody, oxid uhličitý, výpadek proudu a nedostatečná teplota v inkubátoru. I tyto nehody je nutné řešit včas, aby nedocházelo k větší bolesti způsobené opakovanými experimenty. .
Dobré buňky by měly být nasazeny včas
Buňky jsou pasážovány v dávkách, takže i když jedna dávka selže, existuje náhradní. Pro průměrného člověka, jako je ten druhý, to nemusí být snadné. Ale tohle je lekce mé krve. Jakmile byly buňky kontaminovány, celá armáda byla zničena. Tehdy lituji, že jsem semínko nechránil.
Každá buňka má své vlastní vlastnosti a mělo by se s ní zacházet jinak.
Buňky jsou stejné jako lidské a různé buňky mají různé kulturní charakteristiky. Buďte opatrní v procesu pěstování. Různé buněčné linie používají různá média a sérum.
Například buňky hladkého svalstva, které chovám, jsou velmi aktivní a rády jsou živé. Za 2-3 dní tu bude velká populace a já moc nerad jím a piju. Je to opravdu to nejlepší dítě na výchovu. Endoteliální buňky a buňky hladkého svalstva mají podobné povahy, ale jsou velmi nehygienické a nedbalé. Je v nich mnoho sekrečních buněk, takže je třeba je často měnit a omývat. Buňky RAW264.7 jsou také velmi veselé a velmi jedlé. Je nutné je často krmit. Bolest hlavy spočívá v tom, že buňky se snadno aktivují. Je dobře, že lahvička a prostředí, ve kterém jsou kultivovány, jsou bez endotoxinů, ale pro mě jako matku je těžké je uspokojit.
Příprava na práci před tréninkem
Včetně manipulace se spotřebním materiálem, konfigurace činidel, testování sterility atd.
Čištění skleněného nádobí. U skleněného nádobí (lahvička s buňkami, lahvička s živným roztokem, malá lahvička na penicilin atd.) nejprve použijte k čištění prací prášek (pozor na mrtvé rohy) a poté opláchněte. Namočte do kyselého roztoku na více než 24 hodin, poté 10x opláchněte čistou vodou, abyste odstranili zbytkový kyselý roztok. Láhve atd. se během oplachování silně protřepávají. Poté se namočí do dvakrát destilované vody na 24 hodin. Po vysušení zabalte a sušte při 160 stupních po dobu 2 hodin.
Konfigurace činidla. Jako kapalina pro buněčnou kulturu lze obecně použít více než dvakrát destilovanou vodu. A pozor na úpravu hodnoty pH.
Testování sterility. Používejte hlavně filtrační sterilizaci: například trypsin, antibiotika, roztok G-418, různá média, pyruvát sodný, glutamin atd. Některé lze autoklávovat: PBS, D-Hank atd.
Reagencie jsou skladovány v alikvotech
Včetně živného roztoku, pankreatinu, séra atd.
Důležité je zejména sérum. Sérum musí být skladováno při -20 stupních . Pokud nelze spotřebovat jednu lahvičku najednou, lze 40-50ml dávkovat do sterilních lahviček ošetřených kyselinou nebo dokonce skladovat v lahvičkách s penicilinem. Obecně je sérum poskytované výrobcem sterilní a nevyžaduje sterilní filtraci. Pokud je v séru nalezeno velké množství suspendovaných látek, lze sérum přidat do média a filtrovat společně a sérum by nemělo být filtrováno přímo. (Za normálních okolností žádný vliv na buněčnou kulturu)
Lahvové sérum se musí rozmrazovat postupně: 4stupňová lednička se zcela rozpustí a poté se rozdělí do obalu. Během procesu rozpouštění se musí pravidelně protřepávat (pozor, aby nevznikly vzduchové bubliny), aby byla teplota a složení jednotné a omezil se výskyt srážek. Nerozmrazujte přímo z -20 stupňů na 37 stupňů, protože teplota se příliš mění, což může snadno způsobit srážení bílkovin a srážení.
Tepelná inaktivace znamená zahřátí plně rozmraženého séra na 56 stupňů po dobu 30 minut. Poté, co vodní lázeň stoupne na 56 stupňů, vložte sérum, počkejte, až teplota stoupne na 56 stupňů a počítejte čas, obecně s ním jednou za 5 minut rovnoměrně protřepejte. Účelem tohoto tepelného ošetření je deaktivovat složky komplementu v séru. Pokud to není nutné, toto tepelné ošetření se obecně neprovádí, protože způsobí výrazné zvýšení sedimentu a ovlivní kvalitu séra. Věnujte pozornost vlivu změny séra (včetně různých šarží) na buňky.
Silný pocit sterility
Před experimentem byla ultračistá lavice sterilizována UV zářením po dobu 30 minut, povrch aseptického provozu byl otřen 70% etanolem a před zahájením experimentálního provozu byl na několik minut zapnut ventilátor ultračisté lavice. .
Chcete-li se dozvědět více o laboratorní buněčné kultuře, klikněte prosím: http://www.shjasw.com/