Jak všichni víme, typy buněk kultivovaných v laboratoři lze zhruba rozdělit na dva typy: adherentní buňky a suspenzní buňky, přičemž v obou stavech existuje jen několik typů buněk.
Suspenzní buňky označují typ buněk, které mohou růst v suspendovaném stavu v médiu, aniž by se spoléhaly na podporu, jako jsou lymfocyty a většina buněk odvozených z krevního systému. (jako jsou myší leukemické buňky WEHI-3, lidské leukemické buňky K-562, HL-60). V průmyslu bylo stále více adherentních buněk domestikováno a kultivováno v plné suspenzi. V současné době se v průmyslu používají hlavně buňky SP2/0, NS0, CHO, BHK a HEK293, které se používají hlavně pro produkci rekombinantních proteinů; pasážované buňky běžně používané ve veterinárních biologických produktech zahrnují hlavně BHK21 buňky kultivované v plné suspenzi, MDCK buňky; a Vero buňky, PK buňky, ST buňky, Marc145 buňky atd. s pomocí suspenzní kultury mikronosičů má každá buňka jiné vlastnosti.
Závěsné články
Závěsné buňky "thp{0}}" 200x
Obecně se se suspenzními buňkami manipuluje snadněji než s adherentními buňkami, protože pro průchod suspenzních buněk není vyžadována žádná trypsinizace. To však neznamená, že suspenzní buňky se pěstují snadněji než adherentní buňky. Pro nováčky je to náročnější. Vždy existují různé problémy: například proč se vždy objevují mrtvé buňky a diferenciace buněk; je dohodnuto, že průchod je snadný, ale výsledkem bude diferenciace; problémy se znovu objevují po kryokonzervaci a zotavení!
Dále si proberme některé klíčové body o kultivaci suspenzních buněk~
Bod 1: Dost trpělivosti, je to velmi nutné
Mnoho suspenzních buněk má relativně špatnou životaschopnost, když jsou právě získány z kryokonzervace. V tuto chvíli musíme být dostatečně trpěliví, abychom počkali, až buňky dokončí svou samoopravu a vstoupí do fáze logaritmického růstu. Například THP-1 (lidská monocytární leukémie) často potřebuje 7-10 dny období zotavení od rozmrazení do normálního množení; Jurkat, klon E6-1 (buňky lidské T lymfocytární leukémie) také potřebují 5-7 dní po uzdravení. Vraťte se do stavu před zmrazením. Nováčci mohou v tomto období trénink vzdát, buďte proto trpělivější! Kultivace takových buněk je také procesem kultivace trpělivosti!
Bod 2: Uchopte hustotu očkování
Obecně řečeno, hustota suspenzních buněk by neměla být nižší než 500,000/ML. Mnoho suspenzních buněk je závislých na hustotě a neproliferace způsobená nízkou hustotou je také jedním z běžných problémů pro nováčky. Samozřejmě existuje jen velmi málo buněk, jejichž stav se zhoršuje, když je hustota vysoká, jako například W6/32 (myší B buněčné hybridomové buňky). Proto je velmi důležité před kultivací neznámých buněk hledat relevantní informace pro pochopení vlastností buněk. Pouze tím, že znáš sebe a nepřítele, můžeš vyhrát všechny bitvy!
Frekvence výměny média by neměla být omezena na „jasně“. Buňky jsou živé věci. Během kontinuálního kultivačního cyklu mohou být specifické živiny, jako je doplňkové médium a glukóza, přidány několikrát v závislosti na růstovém stavu buněk, aby byl zachován dobrý růstový stav buněk. . Během suspenzního kultivačního procesu s proliferací buněk, spotřebou živin v původním médiu a nárůstem metabolitů se sníží životaschopnost buněk a včasné doplnění živin zajistí buňkám relativně dobré životní prostředí. Nebudu zde zabíhat do podrobností a vyhýbat se častému odstřeďování a výměně kapaliny.
Promluvme si o metodě výměny kapaliny:
①Metoda výměny plné kapaliny odstředivě
To znamená, že odstraňte veškeré staré médium centrifugací (800-1000ot/min, 5 min) a nahraďte čerstvým médiem. Tato metoda je vhodná pro výměnu média za „pevnou kůži“ dobře nakypřených suspenzních buněk (např. K562), nebo pro současnou situaci, kdy jsou buňky v dobrém stavu a hustota je vysoká, což vede k velké spotřebě média. Výhodou této metody je důkladná výměna média a odstranění některých zbytků buněk, ale také to způsobí určitý stupeň mechanického poškození buněk.
②Metoda odstředivé poloviční výměny
To znamená, že odstředěním (800-1000ot/min, 5 minut) 50% buněčné suspenze se nahradí 50% objemu čerstvého média. Tato metoda je vhodná pro porovnávání „pokryteckých“ obtížně kultivovatelných buněk (jako je thp-1) nebo situace, kdy je hustota nízká, ale ve stavu úpravy je třeba odstranit více nečistot.
③Metoda výměny sedimentační kapaliny
To znamená, že místo použití odstředivky se k oddělení média od buněk používá metoda přirozené sedimentace gravitací, aby se nahradilo celé nebo část čerstvého média. Má však svá aplikační omezení – je vhodný pouze pro buňky, které mohou tvořit shluky buněk určité velikosti (jinak se nemohou přirozeně usadit a lze je odstředit pouze při nízké rychlosti), zejména pokud jde o buňky, které se při proliferaci spoléhají na agregaci buněk. , například NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Tato metoda může minimalizovat mechanické poškození způsobené procesem odstřeďování během procesu výměny kapaliny, přičemž zachovává agregovanou buněčnou hmotu a odstranění buněčného odpadu je poměrně důkladné.
Po zvládnutí výše uvedených bodů a dobrého buněčného zárodku je hned za rohem vypěstovat „krásné“ suspenzní buňky!
destička pro buněčnou kulturu
Buněčná kultivační destička Yongyue Medical ve tvaru U se většinou používá pro kultivaci suspenzních buněk za použití lékařského polystyrenu (PS), vyrobeného ve 100,{2}}úrovňové purifikační dílně, sterilizované ozařováním, bez DNázy, RNázy a pyrogenu -zdarma, Bezpečnost a ochrana životního prostředí.
Destičky pro buněčné kultury jsou dostupné v různých specifikacích, aby vyhovovaly potřebám různých bakteriálních kultur. Typy produktů se dělí na 6-dobře, 12-dobře, 24-dobře, 48-dobře, 96-dobře a 384-dobře, která 96-jamka je rozdělena na ploché dno, U-dno, V-dolní dno; Kultivační destičky ve tvaru U se většinou používají pro kultivaci suspenzních buněk; Kultivační destičky ve tvaru V se většinou používají pro imunologické hemaglutinační experimenty.
