Po použití musíme soupravu s osmi zkumavkami promýt. Existuje několik způsobů, jak vyčistit PCR Octal Kit. Na co si mám dát při používání pozor?
Princip experimentální metody: Silikagelová membrána se váže na DNA za podmínek s vysokým obsahem soli a odděluje se od DNA za podmínek s nízkým obsahem soli. Primery, mononukleotidy, enzymy, minerální olej, ionty solí atd. jsou v promývacím roztoku obsahujícím DNA odděleny, protože nemají podobné vlastnosti jako DNA.
Experimentální materiály: produkty PCR, činidla, soupravy, soupravy pro čištění PCR, nástroje, spotřební materiál, 96-jamkové preparační destičky na DNA, 96-jamkové destičky s hlubokými jamkami, 96-jamkové destičky ve tvaru V
1. Výrobce PCR osmi zkumavek hovoří o složení, skladování a stabilitě soupravy
1. Pokyny, spotřební materiál: 96-jamková destička pro přípravu DNA, 96-jamková 1,6ml destička s hlubokými jamkami, 96-jamková destička ve tvaru V.
2. Pufr PCR-A: DNA vazebný roztok. Skladujte těsně uzavřené při pokojové teplotě. Pokud dojde k vysrážení, měl by být před použitím rozpuštěn v teplé lázni o teplotě 65 stupňů a ochlazen na pokojovou teplotu.
3. Koncentrát pufru W2: odstraňte solný roztok. Před použitím přidejte etanol do objemu uvedeného na lahvičce, dobře promíchejte a skladujte při pokojové teplotě. Lze použít 100% etanol nebo 95% absolutní etanol.
4. Eluent: 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5, skladováno v uzavřeném stavu při teplotě místnosti.
2. Výrobce PCR osmičlenných zkumavek hovoří o operačních krocích
Uživatelé si mohou vybrat podtlak nebo centrifugaci.
A. Metoda podtlaku
1. Správně připojte podtlakové zařízení, umístěte 96-jamkovou destičku pro přípravu DNA na podtlakové zařízení; přidejte 3krát pufr PCR-A do roztoku PCR, enzymatického štěpení, enzymatického značení nebo sekvenačního reakčního roztoku (pokud je pufr PCR-A menší než 100 ul, přidejte 100 ul); dobře promíchejte a přeneste do 96-jamkové preparační destičky DNA, zapněte a upravte podtlak na -25-30 palců Hg a pomalu nasávejte roztok z destičky.
2. Přidejte 0,3 ml pufru W2 a absorbujte roztok. Promyjte dvakrát 0,3 ml pufru W2 stejným způsobem.
Potvrďte přidání absolutního etanolu k uvedenému objemu koncentrátu pufru W2 na lahvičce s reagenciemi.
3. Udržujte podtlak a extrahujte 96-jamkovou destičku pro přípravu DNA po dobu 10 minut.
4. Rozetřete 96-jamkovou preparační destičku 6krát na dlouhou vláknitou tkáň s drenážní trubicí směřující dolů.
5. Umístěte 96-jamkovou preparační destičku DNA na 96-jamkovou destičku ve tvaru V, přidejte 25-30ul vody nebo eluátu do středu membrány a nechte 1 minutu stát pokojová teplota. DNA byla eluována centrifugací při 3 000 xg po dobu 5 minut.
B. Odstředivý
1. Přidejte 3 objemy pufru PCR-A (pokud je pufr PCR-A menší než 100 ul, přidejte 100 ul) k reakcím PCR, štěpení, enzymatickému značení nebo sekvenování; promíchejte a přeneste do 96-jamkové DNA v 96-jamkové preparační destičce. Umístěte destičku pro přípravu DNA do 96-jamkové 1,6ml destičky s hlubokými jamkami, centrifugujte při 1000 xg po dobu 1 minuty a filtrát zlikvidujte.
2. Do 96-jamkové preparační destičky pro DNA přidejte 0,3 ml pufru W2, centrifugujte při 1000×g po dobu 1 minuty a filtrát zlikvidujte. Znovu promyjte stejným způsobem 0,3 ml pufru W2. Potvrďte přidání absolutního etanolu k uvedenému objemu koncentrátu pufru W2 na lahvičce s reagenciemi.
3. Umístěte 96-jamkovou destičku pro přípravu DNA do 96-jamkové 1,6ml destičky s hlubokými jamkami a centrifugujte při 3 000×g po dobu 10 minut.
4. Umístěte 96-jamkovou preparační destičku DNA do čisté 96-jamkové spodní destičky ve tvaru V, přidejte 25-30ul vody nebo eluátu do středu membrány a nechte stát 1 minutu při pokojové teplotě. DNA byla eluována centrifugací při 3 000 xg po dobu 5 minut.
Výrobci oktalových trubic PCR mluví o záležitostech, které vyžadují pozornost:
1. Zahřívání eluentu nebo vody na 65 stupňů může pomoci zlepšit účinnost eluce.
2. Molekuly DNA jsou kyselé, doporučuje se skladovat v eluátu 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5.
